產(chǎn)品名稱：Cell Counting Kit-8 細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)試劑盒(CCK-8),增強(qiáng)型
產(chǎn)品編號(hào)：HYCCK-8241
產(chǎn)品組成 500T
CCK-8 增強(qiáng)型溶液 5ml
產(chǎn)品價(jià)格：299元

產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Cell Counting Kit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8），是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測(cè)的試劑盒。CCK-8試劑中含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）是一種類似于MTT的化合物，它在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓（1-Methoxy PMS）存在條件下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產(chǎn)物Formazan （參考圖1），生成的Formazan數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析，細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。

操作步驟
制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí)）

1.制備細(xì)胞懸液：細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.接種到 96 孔板中：按比例（例如：1/2 比例）依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做 3-5 個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組 3-6 個(gè)重復(fù)孔。每孔約 100μl 細(xì)胞懸液。

3.37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：細(xì)胞接種后貼壁大約需要培養(yǎng) 2-4 小時(shí)，如果不需要貼壁，這步可以省去。

4.每孔加入 10μl CCK-8 增強(qiáng)型溶液：由于每孔加入 CCK-8 量比較少，有可能因試劑沾在孔壁帶來(lái)誤差，建議在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻。或者直接配置含 10% CCK-8 的培養(yǎng)基，以換液的形式加入。注意不要在孔中生成氣泡，以免影響吸光度的檢測(cè)。

5.培養(yǎng)箱內(nèi)孵育一定時(shí)間后測(cè)定 450nm 吸光度，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸)，吸光度為縱坐標(biāo)(Y 軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時(shí)間。）

保存條件：4℃避光保存，一年有效。-20 ℃可以儲(chǔ)藏更久，但反復(fù)凍融會(huì)增加背景值，干擾實(shí)驗(yàn)測(cè)定，因此請(qǐng)將經(jīng)常使用的試劑保存在4 ℃。